【污水治理】高選擇性重組基因工程菌治理含汞廢水
創(chuàng)飛格環(huán)保高選擇性重組基因工程菌治理含汞廢水方案
1 實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)中所用的菌株為廈門大學(xué)化學(xué)工程與生物工程系生物工程實(shí)驗(yàn)室利用大腸桿菌E.coliBL21(DE3)為宿主菌，經(jīng)帶有汞操縱子基因和金屬硫蛋白編碼基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化而得到的基因工程菌。汞操縱子基因在細(xì)胞膜處表達(dá)出高特異性的外膜汞結(jié)合蛋白和內(nèi)膜汞轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，同時(shí)金屬硫蛋白基因在細(xì)胞體內(nèi)表達(dá)出對(duì)重金屬有高結(jié)合能力的金屬硫蛋白。金屬硫蛋白是一組富含巰基的低分子量蛋白質(zhì)，它既可高容量地結(jié)合重金屬離子，又可在細(xì)胞體內(nèi)消除重金屬離子對(duì)細(xì)胞本身的毒害作用。為便于重組菌株的篩選，在重組質(zhì)粒中引入了氨芐(Amp)和卡那(Kan)兩種抗生素選擇性標(biāo)記。
基本培養(yǎng)基為L(zhǎng)B培養(yǎng)基(g/L)：蛋白胨10.0；酵母提取物5.0；NaClO。
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1菌種保存
在500mL搖瓶中將重組菌接種到200mL含50mg/L氨芐霉素和30mg/L卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，在37℃下振蕩培養(yǎng)至OD600約為4(振蕩速率為170min)，在1.5mL無(wú)菌微型離心管中加入870 L細(xì)菌培液中和130 L88%的甘油，混合后用液氮速冷，然后保存在-80℃。
2.2汞離子的生物富集
在l000mL搖瓶中裝入300mLLB培養(yǎng)液，加入50mg/L氨芐霉素和30mg/L卡那霉素，然后接入lmI細(xì)菌～甘油培養(yǎng)液，在37℃下振蕩(振蕩速率為170rain)培養(yǎng)至過(guò)夜.取少量菌液接種到相同的LB培養(yǎng)液中，使初始菌體密度為OD400值0.1～0.3，37℃下振蕩培養(yǎng)至OD6000.5～0.7時(shí)添加誘導(dǎo)物異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)至終濃度為1.0mM.再次振蕩培養(yǎng)4h，4℃下離心收獲菌體待用.菌體在使用前先用磷酸緩沖液洗滌，然后懸浮于含不同濃度汞離子的模擬電解廢水中，在37℃下振蕩培養(yǎng)1h，離心收集菌體。為測(cè)量菌體內(nèi)所富集的汞離子含量，將收集的菌體干燥后用70%的高純度硝酸溶液消化過(guò)夜?？疾旄患俾蕰r(shí)，在不同的時(shí)間用0.2 m孔徑的醋酸纖維膜收集菌體，以使菌體和處理液盡快分離開來(lái)。由于重金屬離子易于被容器器壁吸附而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差，實(shí)驗(yàn)中所用的所有導(dǎo)管和玻璃容器使用前都用20%的硝酸溶液浸泡過(guò)夜，然后用去離子水浸洗干凈。
3 結(jié)論
經(jīng)重組基因轉(zhuǎn)化的基因工程菌具有很強(qiáng)的從廢水中富集汞離子的能力。廢水中共存離子的存在加快了重組菌的富集速率，但卻導(dǎo)致菌體的平衡富集能力下降了30%。pH的變化對(duì)重組菌的富集行為影響很小，且重組菌對(duì)汞離子的富集能力比一般的生物吸附法有很明顯的提高。
廢水治理項(xiàng)目合作流程
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實(shí)地考察 |
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了解水質(zhì) |
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定制方案 |  |
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設(shè)備選型 |
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設(shè)備安裝 |  |
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水質(zhì)監(jiān)測(cè) |
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是否委托 |  |
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服務(wù)承諾 本公司本著“技術(shù)第一、服務(wù)第一、信譽(yù)第一”的宗旨，向用戶鄭重承諾
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按客戶要求完成工程任務(wù)，保證工程質(zhì)量； |
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經(jīng)本公司設(shè)計(jì)和提供的污水處理裝置，經(jīng)本設(shè)施處理后保證達(dá)到地方標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)標(biāo)排放標(biāo)準(zhǔn)； |
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主體設(shè)備保修一年，終生提供技術(shù)服務(wù)，設(shè)備在運(yùn)轉(zhuǎn)過(guò)程中出現(xiàn)問題，4小時(shí)內(nèi)給予答復(fù)，24小時(shí)內(nèi)安排專業(yè)人員赴現(xiàn)場(chǎng)服務(wù)； |
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保修期滿，我司對(duì)設(shè)備保養(yǎng)、維修僅收取一定成本費(fèi)。與用戶建立長(zhǎng)期聯(lián)系和技術(shù)交流，以最新的技術(shù)服務(wù)于用戶，免費(fèi)提供技術(shù)咨詢和服務(wù)； |
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廢水處理系統(tǒng)調(diào)試期間，本公司為廠方編寫《廢水處理站操作規(guī)程》，并負(fù)責(zé)培訓(xùn)技術(shù)人員。包括日常操作管理、設(shè)備操作規(guī)程、常見故障檢修、設(shè)備定期保養(yǎng)、水質(zhì)分析等； |
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定期組織客戶回訪工作，了解系統(tǒng)運(yùn)行狀況，認(rèn)真處理客戶反饋的意見，做好工程技術(shù)咨詢工作。 |
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